圓二色光譜對卵清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響
圓二色光譜用于推斷非對稱分子的構(gòu)型和構(gòu)象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(shù)(ε)是不相等的，εL≠εR，即具有圓二色性。如果以不同波長的平面偏振光的波長λ為橫坐標(biāo)，以吸收系數(shù)之差Δε=εL-εR為縱坐標(biāo)作圖，得到的圖譜即是圓二色光譜，簡稱CD。如果某手性化合物在紫外可見區(qū)域有吸收，就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR，透射光不再是平面偏振光，而是橢圓偏振光，摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為：[θ]=3300Δε。圓二色譜也可以摩爾橢圓度為縱坐標(biāo)，以波長為橫坐標(biāo)作圖。由于△ε有正值和負(fù)值之分，所以圓二色譜也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負(fù)性圓二色譜。在紫外可見光區(qū)域測定圓二色譜與旋光譜，其目的是推斷有機(jī)化合物的構(gòu)型和構(gòu)象。
圓二色光譜(簡稱CD)是目前應(yīng)用最為廣泛的測定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的方法，是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的一種快速、簡單、較準(zhǔn)確的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測定，較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡便，對構(gòu)象變化靈敏，所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要手段之一，并已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的構(gòu)象研究中186]。蛋白質(zhì)是由氨基酸通過膚鍵連接而成的具有特定結(jié)構(gòu)的生物大分子。在蛋白質(zhì)中，氨基酸的a一碳原子是不對稱碳原子，具有光學(xué)活性，蛋白質(zhì)的膚鏈走向也是不對稱的結(jié)構(gòu)，也具有光學(xué)活性，當(dāng)平面圓偏振光通過這些光活性的生色基團(tuán)時(shí)，光活性中心對平面圓偏振光中的左、右圓偏振光的吸收不相同，產(chǎn)生了吸收差值，由于這種吸收差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圓偏振光變成了橢圓偏振光，這就是蛋白質(zhì)的圓二色性。通過測定蛋白質(zhì)溶液的圓二色性，可以研究蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)及其變化信息[87一l。一般蛋白質(zhì)的圓二色光譜分為兩段，波長范圍在185一245Inn稱為遠(yuǎn)紫外區(qū)，245一320nln稱近紫外區(qū)。具有不同二級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或多膚所產(chǎn)生的CD譜帶的位置、吸收的強(qiáng)弱都不相同。a一螺旋結(jié)構(gòu)在靠近192Inn有一正的譜帶，在222和208nm處表現(xiàn)出兩個(gè)負(fù)的特征肩峰譜帶;p一折疊的CD譜在216nm有一負(fù)譜帶，在185一Zoonln有一正譜帶;p一轉(zhuǎn)角在206lun附近有一正CD譜帶。遠(yuǎn)紫外區(qū)是蛋白質(zhì)膚鏈的吸收峰，反映了主鏈的構(gòu)象。因此，可利用這一區(qū)域的CD光譜推算蛋白質(zhì)分子中的a一螺旋、p一折疊、p一轉(zhuǎn)角以及無規(guī)卷曲的含量191]。本實(shí)驗(yàn)利用圓二色光譜分析經(jīng)動(dòng)態(tài)超高壓微射流均質(zhì)處理后的卵清蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化情況。